ich gesehen den Antagonismus P2X7 durch P5P zurück, als ich anfing, es für einen anderen Grund zu verwenden, aber könnte nicht verstehen, was die Implikation war. aussieht wie es vermittelt Entzündung, entsprechend diesem em. anscheinend möchten sie den Gebrauch P5P patentieren, jeden entzündlichen Zustand zu behandeln, der bekannt ist, um zu bemannen. befassen Sie mit Ehrgeiz.
http://www.wipo.int/pctdb/en/wo.jsp?wo=200...mp;DISPLAY=DESCANFÜHRUNGSSTRICH
(WO/2006/136004) HEMMUNG der ABHÄNGIGEN BAHNEN ATP-MEDIATED, P2X7 DURCH PYRIDOXAL-5-PHOSPHASTE UND der VITAMIN-B6 IN VERBINDUNG GESTANDENEN MITTEL
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HEMMUNG der ABHÄNGIGEN BAHNEN ATP-MEDIATED, P2X7 DURCH PYRIDOXAL-5-PHOSPHATE UND der VITAMIN-B6 IN VERBINDUNG GESTANDENEN MITTEL
KREUZVERWEIS
Dieses Patent behauptet Priorität US-zur provisorischen Patentanfrage 60/677.830, am 5. Mai 2005 eingereicht, die hierin in vollem Umfang enthalten.
HINTERGRUND
Zunehmenbeweis vorschlägt 93, dass erhebliche Mengen Atp im extrazellularen Platz unter einer Vielzahl der physiologischen und pathophysiologischen Bedingungen akkumulieren können (Vassort, 2001, verhärten et al., 1994, Dubyak et al., 1993). Atp handelt nach Zellen über P2-purinergic Empfänger, um einige verschiedene Antworten einschließlich Absonderung, Chemotaxis, starke Verbreitung, Übertragungfaktoraktivierung und Cytotoxizität (Di Virigilio et al., 2001) zu starten. Zusätzlich kann Atp ein leistungsfähiges Pro-apoptotic Mittel auch sein, das seine Effekte durch die spezifische Aktivierung der Empfänger P2X7 vermittelt (Apasov et al., 1995, Zoeteweij et al., 1996), einer von sieben bekannten P2- purinergic Empfängern. Wenn Atp an Empfänger P2X7 bindet, erleichtert es einen schnellen bidirektionalen Fluss der Kationen, die dadurch Depolarisierung, Einsturz von Na + und K+ Steigungen und massiven Zufluss von Ca2+ starten. Außerdem verursacht anhaltende Anregung der Empfänger P2X7 Anordnung der großen, unspezifischen Poren und erlaubt Permeabilität der Moleküle bis zu 800 DA über Verstärkung einer eindeutigen pore-forming Hälfte (Zanovello et al., 1990, Zheng et al., 1991, Surprenant et al., 1996).
Vitamin B6 ist ein wesentlicher Nährstoff für menschliche Gesundheit. Ein metabolisch aktives Formular des Vitamins ist pyridoxal-5'- Phosphat (P5P) und es mit.einbezogen als Adjunkte in viele enzymatisch kontrollierten Reaktionen einschließlich Aminosäuremetabolismus, Glukosemetabolismus, Hemesynthese, Phospholipidsynthese und
Neurotransmittersynthese. Einige diätetische Mittel können als Vorläufer zu P5P arbeiten. Diese enthalten Pyridoxin, Pyridoxal, Pyridoxamin sowie P5P selbst. Das Ausdruckvitamin B6 anspricht normalerweise Pyridoxinhydrochlorid n, da dieses die am geläufigsten vorhandene vorhandene Ergänzung des Vitamins B6 ist. Jedoch einschließen in Verbindung gestandene Mittel des Vitamins B6 eine Vielzahl der bekannten Entsprechungen, der Stoffwechselprodukte, der Ableitungen oder der Vorläufer er, wie beschrieben und unten behandelt.
Einige Studien gezeigt, dass P5P die Effekte extrazellularen Atps in einigen verschiedenen Gewebetypen einschließlich den Vagusnerv des Inneren (wünschen Sie et al., 1999, CanAm Bioresearch, 2003) (Trezise et al., 1994), die Vas deferens (Trezise et al., 1994) und die Zellen des glatten Muskels hemmt (LaI et al., 1993). Vorher erschienene Studien gezeigt, dass P5P Atp verursachten Kalziumzufluß in frisch lokalisierten erwachsenen Ratte cardiomyocytes (Wangs et al., 1999, CanAm Bioresearch, 2003) hemmt, und die positiven inotropic Effekte von Atp auf lokalisierte gedurchströmte Ratteinnere (Wangs et al., 1999, CanAm Bioresearch, 2003). Zusätzlich gezeigt einige erschienene Studien, dass P5P das Atp-Binden zum Herzsacrolemma (Wangs et al., 1999), zum Vagusnerv (Trezise et al., 1994) und zu den Vas deferens hemmt (Trezise et al., 1994).
Es gibt aktuell sieben bekannte P2 purinergic Empfänger, P2X1, P2X2, P2X3, P2X4, P2X5, P2X6 und P2X7, die bekannt, um heteromeric Komplexe unter selbst zu bilden. Atp bekannt, um nach P2X7 zu handeln. Jedoch bis jetzt bekannt es nicht, in welchem Ausmaß jeder P2-purinergic Empfänger durch P5P oder alle mögliche anderen in Verbindung gestandenen Mittel des Vitamins B6 beeinflußt, und ob P2-purinergic Empfänger durch in Verbindung gestandene Mittel des Vitamins B6 in den verschiedenen Weise beeinflußt. P5P gezeigt worden, um etwas Antagonisteneffekt auf Empfänger P2 zu haben, gefunden worden z.B. Empfänger P2X7, aber, um bedeutende Sorte-abhängige Veränderlichkeit in seiner Kraft zu haben, die Fragen der Wirksamkeit und Methode der Tätigkeit (Hibell, 2001) aufgeworfen. Der Antagonisteneffekt von P5P auf Empfänger P2X7 ist aktuell die Basis von etwas Ungewissheit, da es ist unklar, ob es, ein irreversibler oder teilweise umschaltbarer Antagonist (Michel, 2000) ein konkurrierendes ist.
Hohe Aktivität des Empfängers P2X7 gefunden worden, in Epithelkrebs (Coutinho-Silva et al., 2005), in der Leukämie (Zhang et al., 2004), in den Hirntumoren (Guo et al., 2004), in der Rückenmarkverletzung (Wang, 2004), in der Tuberkulose (Mancino et al., 2001), in der Alzheimerkrankheit (Parvathenani et al., 2003), in den neurodegenerative Krankheiten im Allgemeinen (LeFeuvre et al., 2002), in der autosomalen rückläufigen polycystic Nierekrankheit (Hillman et al., 2004), im Diabetes, einschließlich Typen I Diabetes (Elliott und Higgins, 2004), Prostatakrebs (Slater et al., 2004), Osteoporose, Knochenanordnung und Aufnahme impliziert zu werden (KE et al., 2003), rheumatische Arthritis, multiple Sklerose, Myasthenia gravis, Crohns Krankheit, septischer Schlag und periodontale Infektion (Mϋhl et al., 2003).
Interleukin-1 (IL-I) ist ein wichtiger entzündlicher Vermittler, der im Überfluss durch aktivierte Monozyten und Makrophagen (Dinarello, 1996) produziert. Entzündung und Entzündungantwort impliziert in einer großen Vielzahl von Krankheiten. Eine Entzündungantwort kann eine Wundheilende Antwort der Reihe nach starten. Jedoch können chronische Entzündung oder eine nicht angebrachte entzündliche Antwort zu die Anordnung einer chronischen Wunde führen. Chronische Entzündung kann zu Gewebeschaden durch die überschüssige Freigabe der reagierenden Sauerstoffsorte auch führen. Nicht angebrachte entzündliche Antwort kann zu Abszeßanordnung auch führen. Entzündliches Wartekörperlichsyndrom, wie Sepsis, auftritt, wenn Entzündung den vollständigen Organismus überwältigt. Entzündung der Organe impliziert worden in solchen Krankheiten oder in Störungen wie Blinddarmentzündung (Entzündung des Anhanges), Arteritis (Entzündung der Arterien), Arthritis (Entzündung der Verbindungen), Blepharitis (Entzündung der Augenlider), Bronchiolitis
(Entzündung der Bronchiolen), Bronchitis (Entzündung der Bronchien), Bursitis (Entzündung des Bursas), Cervicitis (Entzündung des Halses), Cholangitis (Entzündung des Gallenwegs), Cholecystitis (Entzündung der Gallenblase), chorioamnionitis (Entzündung des amniotic Beutels), Kolitis (Entzündung des Doppelpunktes), Bindehautentzündung (Entzündung der Bindehaut), Blasenkatarrh (Entzündung der Blase), dacryoadenitis (Entzündung von
tränenreiche Drüse), Dermatitis (Entzündung der Haut), dermatomyositis (Entzündung der Haut und der Muskeln), Gehirnentzündung (Entzündung des Gehirns), Endokarditis (Entzündung des Endocardium), Endometritis (Entzündung des Endometrium), Enteritis (Entzündung des kleinen Darmes), Enterocolitis (Entzündung der kleinen und großen Därme), Epicondylitis (Entzündung des epicondyle), epididymitis (Entzündung des Epididymis), fasciitis (Entzündung der Binde), fibrositis (Entzündung des faserartigen Bindegewebes), Gastritis (Entzündung des Magens), Gastroenteritis (Entzündung des Magens und des kleinen Darmes), Gingivitis (Entzündung des Gingiva), Hepatitis (Entzündung der Leber), hidradenitis suppurativa (Entzündung der apocrine Schweißdrüsen), Ileitis (Entzündung des Ileums), iritis (Entzündung der Blende), Laryngitis (Entzündung des Kehlkopfes), Brustdrüsenentzündung (Entzündung der Milch- Drüse), Meningitis (Entzündung der meninges), myelitis (Entzündung des Rückenmarks), Myocarditis (Entzündung des Myocardiums), myositis (Entzündung des Muskels), Nephritis
(Entzündung der Niere), omphalitis (Entzündung des Nabelnetzkabels), oophoritis (Entzündung der Eierstöcke), Orchitis (Entzündung des Testikels), osteitis (Entzündung des Knochens), otitis (Entzündung des Ohrs), Pancreatitis (Entzündung des Pankreas), Parotitis (Entzündung der Parotis- Drüse), Perikarditis (Entzündung des Herzbeutels), Peritonitis (Entzündung FO der Peritoneum), Pharyngitis (Entzündung der Pharynx), pleuritis (Entzündung des Rippenfells), phlebitis (Entzündung der Adern), Pneumonie/Lungenentzündung (Entzündung der Lungen), proctitis (Entzündung von Rektum), Prostatitis (Entzündung der Prostata), Rhinitis (Entzündung des nasalen Futters), Salpingitis (Entzündung der Eileiter), Sinusitis (Entzündung der Kurve des Schädels), Stomatitis (Entzündung des Munds), synovitis (Entzündung der synovial Membrane), Tendonitis (Entzündung der Sehne), Tonsillitis (Entzündung der Mandeln), uveitis (Entzündung des Uvea), Vaginitis (Entzündung des vaginalen Mucosa), Vasculitis (Entzündung der Blutgefäße oder der Lymphebehälter) und vulvitis (Entzündung des Vulva).
IL-I biologische Aktivität berechnet von zwei in Verbindung gestanden aber von den eindeutigen Polypeptiden, VOM IL lα und von IL-lβ (Dinarello, 1996 und 1998). Aktivität IL-lβ aufeinander bezogen worden mit Atp-Stufen, wie unten behandelt. Interessant gefunden worden lipopolysaccharide/ATP-induced Absonderung von IL-lβ ex Vivo, in den Blutkulturen vollständig unterdrückt zu werden, die von den Mäusen des Ausscheidungswettkampfs P2X7 erhalten, jedoch ist das Verhältnis zwischen P2X7 und IL-lβ kaum erforscht (Muhl, 2003).
Menschliches IL-I synthetisiert als kDa 31, das Proist, das inkompetent ist, an den Empfänger des Typs 1 IL-I (Mosely et al., 1987) zu binden. Um Aktivität zu gewinnen, muss Pro-IL-lβ durch caspase-1 zerspaltet werden um einem kDa 17 Karboxyl- terminus-berechnetes Polypeptid (Thornberry et al., 1992 zu erbringen; Ceretti et al., 1992). IL-lβ befreit von den Monozyten und von den Makrophagen über einen atypischen ausscheidenden Mechanismus, der nicht den Endoplasmanetzmagen und den Golgi Komplex mit.einbezieht (Rubartelli et al., 1990). Freigabe von IL-lβ von den Zellen, die angeregt, um dieses cytokine zu produzieren, ist im Allgemeinen ein wirkungsloser Prozess. Die Majorität der eben synthetisierten cytokine Moleküle bleibt die verbundene Zelle und/oder vermindert (Hogquist et al., 1991; Perregaux et al., 1998; Chin et al., 1993). Um die leistungsfähige proteolytische Spaltung von pro- IL-lβ und Freisetzung von dem kDa 17 fälligen Peptid zu fördern, müssen die cytokine-produzierenden Zellen mit einem Absonderungauslöseimpuls wie Adenosintriphosphat behandelt werden (Atp; Perregaux et al., 1998; Laliberte et al., 1999; Grahames et al., 1999).
Extrazellulares Atp gefunden worden, um die Kinetik der Verarbeitung und Freigabe von IL-lβ in beiden Monozyten und in Makrophagen deutlich zu beschleunigen, die mit lipopolysaccharrides vorbereitet worden (LANGSPIELPLATTEN; Laliberte et al., 1999; Grahames et al., 1999; Perregaux et al., 1998). Das Atp verursachte Änderungen vermittelt über die Aktivierung der purinergic Empfänger P2X7 (Grahames et al., 1999; Labassi et al., 2002), die der Reihe nach die Verarbeitung und die Freigabe von IL-lβ beschleunigen (Perregaux et al., 1992; Perregaux et al., 1994; Perregaux et al., 1998).
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
Die anwesende Erfindung verwiesen auf einen neuen Gebrauch für pyridoxal-5-phosphate (P5P).
Besonders, verwiesen die anwesende Erfindung auf eine Methode des Modulierens von P2X7, das eine therapeutisch wirkungsvolle Menge P5P oder ein unter pharmazeutischem Gesichtspunkt annehmbares Salz davon zu einem Patienten in der Notwendigkeit davon ausübend enthält.
Ein anderer Aspekt der anwesenden Erfindung ist die Methode, worin die therapeutisch wirkungsvolle Menge des pyridoxal-5'- Phosphats zwischen 0.5 und 50 mg/kg Körpergewicht ist.
Ein anderer Aspekt der anwesenden Erfindung ist die Methode, worin die therapeutisch wirkungsvolle Menge des pyridoxal-5'- Phosphats zwischen 1 und 15 mg/kg Körpergewicht ist.
Ein anderer Aspekt der anwesenden Erfindung ist die Methode, worin der Patient menschlich ist.
Ein anderer Aspekt der anwesenden Erfindung ist die Methode, worin der Patient eine Krankheit oder eine metabolische Störung hat.
Ein anderer Aspekt der anwesenden Erfindung ist die Methode, worin die metabolische Störung Epithelkrebs, Leukämie, Hirntumor, Rückenmarkverletzung, Tuberkulose, Alzheimerkrankheit, neurodegenerative Krankheit, autosomale rückläufige polycystic Nierekrankheit, Diabetes, Prostatakrebs, Osteoporose, Autoimmunkrankheit, rheumatische Arthritis, multiple Sklerose, Myasthenia gravis, Crohns Krankheit, septischer Schlag oder periodontale Infektion ist.
Ein anderer Aspekt der anwesenden Erfindung ist die Methode, worin das Autoimmunkrankheit vom Lupus erythematosis und von der rheumatischen Arthritis ausgewählt.
Ein anderer Aspekt der anwesenden Erfindung ist die Methode, worin der Diabetes Typ I Diabetes ist.
Ein anderer Aspekt der anwesenden Erfindung verwiesen auf eine Methode der Steuerung oder der Vermittlung der Entzündungantwort, die eine therapeutisch wirkungsvolle Menge P5P oder ein unter pharmazeutischem Gesichtspunkt annehmbares Salz ausübend davon zu einem Patienten in der Notwendigkeit davon enthält.
Ein anderer Aspekt der anwesenden Erfindung verwiesen auf eine Methode der Verringerung oder der Vermittlung der Stufen IL-lβ bei einem Patienten in der Notwendigkeit, die davon eine therapeutisch wirkungsvolle Menge P5P oder ein unter pharmazeutischem Gesichtspunkt annehmbares Salz ausübend davon zum Patienten enthält.
Ein anderer Aspekt der anwesenden Erfindung ist die Methode, worin die Krankheit oder die metabolische Störung eine entzündliche Krankheit oder eine Störung ist.
Ein anderer Aspekt der anwesenden Erfindung ist die Methode, worin die Krankheit oder die metabolische Störung ist eine Krankheit oder eine Störung, die indem sie Stufen IL-lβ gekennzeichnet haben, die höher als Normal, entweder lokal oder körperlich sind.
Ein anderer Aspekt der anwesenden Erfindung ist die Methode, worin die entzündliche Krankheit oder die Störung eine chronische Wunde ist, chronische Entzündung, Abszeßanordnung, entzündliches Wartekörperlichsyndrom, einschließlich Sepsis, Blinddarmentzündung, Arteritis, Arthritis, Blepharitis, Bronchiolitis, Bronchitis, Bursitis, Cervicitis, Cholangitis, Cholecystitis, chorioamnionitis, Kolitis, Bindehautentzündung, Blasenkatarrh, dacryoadenitis, Dermatitis, dermatomyositis, Gehirnentzündung, Endokarditis, Endometritis, Enteritis, Enterocolitis, Epicondylitis, epididymitis, fasciitis, fibrositis, Gastritis, Gastroenteritis, Gingivitis, Hepatitis, hidradenitis suppurativa, Ileitis, iritis, Laryngitis, Brustdrüsenentzündung, Meningitis, myelitis, Myocarditis, myositis, Nephritis, omphalitis, oophoritis, Orchitis, osteitis, otitis, Pancreatitis, Parotitis, Perikarditis, Peritonitis, Pharyngitis, pleuritis, phlebitis, Pneumonie/Lungenentzündung, proctitis, Prostatitis, Rhinitis, Salpingitis, Sinusitis, Stomatitis, synovitis, Tendonitis, Tonsillitis, uveitis, Vaginitis, Vasculitis oder vulvitis.
Ein anderer Aspekt der anwesenden Erfindung ist die Methode, worin die entzündliche Krankheit oder die Störung eine ist, die spezifisch durch erhöhte Niveaus von IL-lβ gekennzeichnet.
Solche Krankheiten oder Störungen umfassen entzündliche Darmkrankheit, Geschwüre hervorrufende Kolitis, Crohns Krankheit, Sjogrens Syndrom, Knochenabnutzung, neuroinflammatory Krankheiten wie Alzheimerkrankheit, Parkinson-Krankheit und traumatische Gehirnverletzung, sowie periodontale Krankheit.
Ein anderer Aspekt der anwesenden Erfindung ist der Gebrauch von einer therapeutisch wirkungsvollen Menge P5P oder unter pharmazeutischem Gesichtspunkt annehmbaren Salz davon für die Behandlung oder Verhinderung einer metabolischen Störung, die vom Gruppenbestehen ausgewählt: Epithelkrebs, Leukämie, Hirntumor, Rückenmarkverletzung, Tuberkulose, Alzheimerkrankheit, neurodegenerative Krankheit, autosomale rückläufige polycystic Nierekrankheit, Diabetes, Prostatakrebs, Osteoporose, Autoimmunkrankheit, rheumatische Arthritis, multiple Sklerose, Myasthenia gravis, Crohns Krankheit, septischer Schlag und periodontale Infektion.
Ein anderer Aspekt der anwesenden Erfindung ist der Gebrauch von einer therapeutisch wirkungsvollen Menge P5P oder unter pharmazeutischem Gesichtspunkt annehmbaren Salz davon für die Behandlung oder Verhinderung einer entzündlichen Krankheit oder der Störung, die vom Gruppenbestehen ausgewählt: chronische Wunde, chronische Entzündung, Abszeßanordnung, entzündliches Wartekörperlichsyndrom, einschließlich Sepsis, Blinddarmentzündung, Arteritis, Arthritis, Blepharitis, Bronchiolitis, Bronchitis, Bursitis, Cervicitis, Cholangitis, Cholecystitis, chorioamnionitis, Kolitis, Bindehautentzündung, Blasenkatarrh, dacryoadenitis, Dermatitis, dermatomyositis, Gehirnentzündung, Endokarditis, Endometritis, Enteritis, Enterocolitis, Epicondylitis, epididymitis, fasciitis, fibrositis, Gastritis, Gastroenteritis, Gingivitis, Hepatitis, hidradenitis suppurativa, Ileitis, iritis, Laryngitis, Brustdrüsenentzündung, Meningitis, myelitis, Myocarditis, myositis, Nephritis, omphalitis, oophoritis, Orchitis, osteitis, otitis, Pancreatitis, Parotitis, Perikarditis, Peritonitis, Pharyngitis, pleuritis, phlebitis, Pneumonie/Lungenentzündung, proctitis, Prostatitis, Rhinitis, Salpingitis, Sinusitis, Stomatitis, synovitis, Tendonitis, Tonsillitis, uveitis, Vaginitis, Vasculitis oder vulvitis.
Ein anderer Aspekt der anwesenden Erfindung ist der Gebrauch einer therapeutisch wirkungsvollen Menge P5P oder eines unter pharmazeutischem Gesichtspunkt annehmbaren Salzes davon für die Behandlung oder
Verhinderung einer entzündlichen Krankheit gekennzeichnet durch höheres als normale Niveaus von IL-lβ ausgewählt von von der bestehenden entzündlichen Darmkrankheit der Gruppe, von der Geschwüre hervorrufenden Kolitis, Crohns der Krankheit, Sjogrens dem Syndrom, von der Knochenabnutzung, von den neuroinflammatory Krankheiten (wie Alzheimerkrankheit, Parkinson-Krankheit und traumatischer Gehirnverletzung) und von der periodontalen Krankheit.
Ein anderer Aspekt der anwesenden Erfindung ist der Gebrauch, worin die therapeutisch wirkungsvolle Menge des pyridoxal-5'- Phosphats zwischen 0.5 und 50 mg/kg Körpergewicht ist.
Ein anderer Aspekt der anwesenden Erfindung ist der Gebrauch, worin die therapeutisch wirkungsvolle Menge des pyridoxal-5'- Phosphats zwischen 1 und 15 mg/kg Körpergewicht ist.
Ein anderer Aspekt der anwesenden Erfindung ist ein Installationssatz, der P5P und Anweisungen für den Gebrauch der selben für Behandlung einer Krankheit oder der Störung oben beschrieben enthält.
Ein anderer Aspekt der anwesenden Erfindung ist der Gebrauch P5P in der Vorbereitung eines Medikaments für die Behandlung von irgendwelchen der Krankheiten oder der Störungen, die oben beschrieben.
KURZE BESCHREIBUNG DER ZEICHNUNGEN
Abbildung 1 zeigt Zellenentwicklungsfähigkeit in den Zellen des Elternteils HEK 293, die mit unterschiedlichen Konzentrationen von Atp behandelt.
Abbildung 2 zeigt Zellenentwicklungsfähigkeit HEK 293 in den Zellen, welche beständig die Ratte P2X7 ausdrücken, behandelt mit unterschiedlichen Konzentrationen von Atp.
Abbildung 3 zeigt Zellenentwicklungsfähigkeit in den Zellen des Elternteils HEK 293, behandelt mit 2μM von Atp 30 Minuten, die Behandlung mit unterschiedlichen Konzentrationen von P5P folgen.
Abbildung 4 zeigt Zellenentwicklungsfähigkeit HEK 293 in den Zellen, welche beständig die Ratte P2X7 ausdrücken, behandelt mit 0.4 μM Atp 30 Minuten, die Behandlung mit unterschiedlichen Konzentrationen von P5P folgen.
Abbildung 5 zeigt den Effekt der verschiedenen Konzentrationen des Pyridoxins (0, 0.5, 1.5, 5, 15, 50, μM 150) auf Atp (5 Millimeter) verursachte IL-1β Verarbeitung und Freigabe von PMA/von LANGSPIELPLATTEN angeregten Zellen THP-1.
Abbildung 6 zeigt den Effekt der verschiedenen Konzentrationen des Pyridoxinphosphats (0, 0.5, 1.5, 5, 15, 50, μM 150) auf Atp (5 Millimeter) die verursachte β IL-1 Verarbeitung und der Freigabe von PMA/von LANGSPIELPLATTEN angeregten Zellen THP-1.
Abbildung 7 zeigt den Effekt der verschiedenen Konzentrationen des Pyridoxals (0, 0.5, 1.5, 5, 15, 50, μM 150) auf Atp (5 Millimeter) die verursachte β IL-1 Verarbeitung und der Freigabe von PMA/von LANGSPIELPLATTEN angeregten THP- 1 Zellen.
Abbildung 8 zeigt den Effekt der verschiedenen Konzentrationen des Pyridoxalphosphats (0, 0.5, 1.5, 5, 15, 50, μM 150) auf Atp (5 Millimeter) verursachte IL-1β Verarbeitung und Freigabe von PMA/von LANGSPIELPLATTEN angeregten Zellen THP-1.
Abbildung 9 zeigt den Effekt der verschiedenen Konzentrationen des Pyridoxamins (0, 0.5, 1.5, 5, 15, 50, μM 150) auf Atp (5 Millimeter) die verursachte β IL-1 Verarbeitung und der Freigabe von PMA/von LANGSPIELPLATTEN angeregten Zellen THP-1.
Abbildung 10 zeigt den Effekt der verschiedenen Konzentrationen des Pyridoxaminphosphats (0, 0.5, 1.5, 5, 15, 50, μM 150) auf Atp (5 Millimeter) die verursachte β IL-1 Verarbeitung und der Freigabe von PMA/von LANGSPIELPLATTEN angeregten Zellen THP-1.
BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
Der anwesende Erfinder gezeigt, dass P5P als P2-purinergic Empfängerantagonist arbeitet. Außerdem gezeigt der anwesende Erfinder jetzt, dass P5P als leistungsfähiger Antagonist des Empfängers P2X7 arbeitet.
Der anwesende Erfinder gefunden auch, dass P5P als Hemmnis der Freigabe IL-lβ oder des Ausdrucks arbeitet. Überraschend gefunden der anwesende Erfinder auch, dass diese Aktivität der Hemmung IL-lβ nicht eine Eigenschaft anderen Vitamins ist B6, das in Verbindung gestanden, zusammensetzt, wie Pyridoxal, Pyridoxamin und dergleichen, und scheint, zu P5P eindeutig zu sein.
Wie hierin verwendet, „Vitamin B6 in Verbindung stand Mittel“, bedeutet jeden möglichen Vorläufer, Stoffwechselprodukt, Ableitung oder Entsprechung des Vitamins B6 davon. Beispiele der in Verbindung gestandenen Mittel des Vitamins B6 umfassen, aber begrenzt nicht auf pyridoxal-5-phosphate (P5P), Pyridoxal, Pyridoxin, Pyridoxinphosphat, Pyridoxamin und Pyridoxaminphosphat.
Die Erfindung umfaßt auch unter pharmazeutischem Gesichtspunkt annehmbare Salze der Mittel der Erfindung. Die Mittel der Erfindung sind zur Formung des unter pharmazeutischem Gesichtspunkt annehmbaren Säurezusatzes und/oder der niedrigen Salze fähig. Unter pharmazeutischem Gesichtspunkt annehmbare Säurezusatzsalze der Mittel der Erfindung enthalten die Salze, die von den ungiftigen anorganischen Säuren wie salzsauer berechnet, Stickstoff, Phosphor, schweflig, Bromwasserstoff-, hydriodic, fluss-sauer, phosphorig, und dergleichen, sowie die Salze, die von den ungiftigen organischen Säuren, wie aliphatischen Mono- und der Di karboxylhaltigen Säuren berechnet, Phenyl--ersetzten alkanoische Säuren, Hydroxyl- alkanoische Säuren, alkanedioic Säuren, aromatische Säuren, aliphatische und aromatische Sulfosäuren, etc. Solche Salze enthalten folglich Sulfat, Pyrosulfat, Bisulfat, Sulfit, Bisulfit, Nitrat, Phosphat, monohydrogenphosphate, dihydrogenphosphate, Metaphosphat, Pyrophosphat, Chlorverbindung, Bromid, Jodid, Azetat, trifluoroacetate, Propionat, Kaprylat, Isobutyrat, Oxalat, malonate, Succinat, suberate, sebacate,
fumarsaures Salz, Maleate, mandelate, Benzoat, chlorobenzoate, methylbenzoate, dinitrobenzoate, Phthalat, benzenesulfonate, toluenesulfonate, phenylacetate, Zitrat, Laktat, Maleate, Tartrat, methanesulfonate und dergleichen. Auch erwogen Salze der Aminosäuren wie arginate und dergleichen und Glukonat, galacturonate, N-Methylglucamine, etc. (sehen Sie Berge et al., 1977). Der Ausdruck „unter pharmazeutischem Gesichtspunkt annehmbare Salze“ umfaßt auch alle unter pharmazeutischem Gesichtspunkt annehmbaren niedrigen Salz- einschließlich, aber begrenzt nicht auf, Aminsalze, trialkyl Aminsalze und dergleichen. Solche Salze können von den Fachleuten ziemlich betriebsbereit gebildet werden, die Standardtechniken verwenden.
Die Säurezusatzsalze der grundlegenden Mittel vorbereitet en, indem man mit dem freien niedrigen Formular mit einer genügenden Menge der gewünschten Säure in Verbindung tritt, um das Salz in der herkömmlichen Weise zu produzieren. Das freie niedrige Formular kann regeneriert werden, indem man mit dem Salzformular mit einer Unterseite in Verbindung tritt und die freie Unterseite in der herkömmlichen Weise lokalisiert. Die freien niedrigen Formulare unterscheiden von ihren jeweiligen Salzformularen ein wenig in bestimmten physikalischen Eigenschaften wie Löslichkeit in den polaren Lösungsmitteln, aber anders sind die Salze mit ihrer jeweiligen freien Unterseite zwecks der anwesenden Erfindung gleichwertig. Niedrige Salze gebildet mit Metallen oder Amine, wie Alkali und Erdalkalimetalle oder organische Amine. Beispiele der Metalle, die als Kationen benutzt, umfassen, aber begrenzt nicht auf, Natrium, Kalium, Magnesium und Kalzium. Beispiele der verwendbaren Amine sind N, N'- dibenzylethylenediamine, chloroprocaine, Cholin, Diethanolamin, Äthylendiamin, N-methylglucamine und Prokain.
Einige der Mittel, die hierin beschrieben, enthalten eine oder mehrere asymetrischen Mitten und dieses kann Erhöhung zu den Enantiomeren, zu den disasteriomers und zu anderen stereroisomeric Formularen geben, die in absoluter Stereochemie ausgedrückt als ® definiert werden können - oder (S) -. Die anwesende Erfindung bedeutet, um all diese mögliche diasteriomers und Enantiomere sowie ihre racemischen und optisch reinen Formulare zu umfassen. Optisch aktives ® - und (S) - Isomere kann unter Verwendung der chiralen synthons oder der chiralen Reagenzien vorbereitet werden, oder unter Verwendung der herkömmlichen Techniken gelöst werden. Wenn die Mittel, die hierin beschrieben, olefinische Doppelbindungen enthalten
oder andere Mitten der geometrischen Symmetrie und wenn nicht anders angegeben, beabsichtigt es, dass die Mittel e-und a-geometrische Isomere enthalten. Ebenso sollen alle tautomeric Formulare umfaßt werden.
Obgleich es für ein Mittel möglich ist, das für Gebrauch in den Methoden der Erfindung, in einer Maßeinheitsdosierungform alleine ausgeübt zu werden verwendbar ist, vorzugsweise ausgeübt das Mittel als zusatz als pharmazeutischer Aufbau el, der für Gebrauch in den Methoden der Erfindung verwendbar ist. Ein pharmazeutischer Aufbau enthält eine unter pharmazeutischem Gesichtspunkt annehmbare Fördermaschine und ein Mittel. Eine unter pharmazeutischem Gesichtspunkt annehmbare Fördermaschine einschließt t, aber begrenzt nicht auf, physiologisches salziges, Rufstrommaschinen, phosphatgepuffertes salziges, und andere Fördermaschinen, die im Art.-pharmazeutischen Aufbau bekannt sind, können Zusätze, z.B., Ausgleicher, Antioxydantien, Farbstoffe, Bindemittel, Mappen, Verdickungsmittel, zerstreuenmittel, readsorpotion Vergrößerer, Buffer, Tenside, Konservierungsmittel, Emulsionsmittel, isotonizing Mittel und Verdünnungsmittel auch enthalten. Unter pharmazeutischem Gesichtspunkt annehmbaren Fördermaschinen und Zusätzen gewählt so, dass Nebenwirkungen vom pharmazeutischen Mittel herabgesetzt und die Leistung des Mittels beendet nicht oder gehemmt, in dem Ausmaß, dass Behandlung erfolglos ist.
Methoden des Vorbereitens des pharmazeutischen Aufbaus, der eine unter pharmazeutischem Gesichtspunkt annehmbare Fördermaschine und ein Mittel verwendbar sind für Gebrauch in den Methoden der Erfindung enthält, bekannt zu denen der Fähigkeit im Art. Alle Methoden können den Jobstepp des Holens des Mittels in Verbindung mit der Fördermaschine und den Zusätzen umfassen. Im Allgemeinen vorbereitet die Formulierungen durch das Mittel nd der Erfindung in Verbindung mit einer flüssigen Fördermaschine oder einer fein geteilten festen Fördermaschine gleichmäßig und vertraut, holend oder und dann wenn notwendig und formen das Produkt in das gewünschte Maßeinheitsdosierungformular.
Ein Arzt oder ein Tierarzt der gewöhnlichen Fähigkeit können ein Thema betriebsbereit feststellen, das unter einem Krankheitzustand leiden ist oder kann, der Bahnen P2X7 wie P2X7 abhängiges apoptosis, Entzündungantwort implizieren könnte abhängige oder
erhöhte extrazellulare Niveaus von IL-lβ. Unabhängig davon den Verwaltungsweg ausgewählt, können P5P oder ein unter pharmazeutischem Gesichtspunkt annehmbares Salz in unter pharmazeutischem Gesichtspunkt annehmbare Maßeinheitsdosierungformulare durch die herkömmlichen Methoden davon formuliert werden, die den pharmazeutischen Art. bekannt sind. Eine wirkungsvolle aber ungiftige Quantität des Mittels kann in der Behandlung eingesetzt werden.
Das therapeutische Mittel von P5P oder von unter pharmazeutischem Gesichtspunkt annehmbaren Salz kann in den enteral Maßeinheitsdosierungformen, wie davon ausgeübt werden z.B. Tabletten, stützen-freigibt Tabletten, enterische überzogene Tabletten, Kapseln e, stützen-freigibt Kapseln, enterische überzogene Kapseln, Pillen, Puder, Körnchen, Lösungen und dergleichen und. Sie können, wie auch parenteral ausgeübt werden z.B. subkutan intramuskulös intradermal intramammarally intravenös und andere Verwaltungsmethoden, die im Art. bekannt sind.
Obgleich es für P5P oder ein unter pharmazeutischem Gesichtspunkt annehmbares Salz davon möglich ist, wie oben beschrieben, in einer Maßeinheitsdosierungform alleine ausgeübt zu werden, vorzugsweise ausgeübt das Mittel als zusatz als pharmazeutischer Aufbau er.
Durch eine „wirkungsvolle“ Menge oder eine „therapeutisch wirkungsvolle Menge“ einer Droge oder pharmakologisch des aktiven Mittels bedeutet eine ungiftige aber genügende Menge der Droge oder des Mittels, zum des gewünschten Effektes bereitzustellen. _ d Menge das sein „wirkungsvoll“ werden schwanken von abhängig von dem Thema, abhängig von dem d Alter und der allgemein Zustand von d Einzelperson, d bestimmt aktiv Mittel oder Mittel, und dergleichen. So ist es nicht immer möglich, eine genaue „wirkungsvolle Menge zu spezifizieren.“ Jedoch kann eine passende „wirkungsvolle“ Menge in jedem einzelnen Fall durch einen von gewöhnlicher Fähigkeit in der Kunst unter Verwendung des Routineexperimentierens festgestellt werden.
Ein therapeutisches Mittel kann ausgeübt werden z.B. nachdem ein Krankheitzustand bestimmt worden. Ein therapeutisches Mittel kann vor dem Anfang eines Ereignis- oder Krankheitzustandes auch ausgeübt werden.
Ein therapeutisches Mittel, wie oben definiert kann in einen pharmazeutischen Aufbau für Gebrauch in den Methoden der Erfindung formuliert werden.
Der gewöhnlich erfahrene Arzt oder der Tierarzt betriebsbereit feststellen und vorschreiben eine therapeutisch wirkungsvolle Menge P5P oder unter pharmazeutischem Gesichtspunkt annehmbares Salz davon res es, um Bahnen P2X7, Entzündungantwort oder extrazellulare Niveaus von IL-lβ zu modulieren abhängige. Wenn sie so fortfahren konnten der Arzt oder der Tierarzt verhältnismäßig niedrige Dosierungen zuerst einsetzen und die Dosis nachher erhöhen, bis eine maximale Antwort erhalten. Gewöhnlich können die bestimmte Krankheit, die Schwere der Krankheit, der Umfang des Zellentodes oder eines -druckes, das ausgeübt zu werden Mittel, der Verwaltungsweg und die Eigenschaften des behandelt zu werden Säugetieres, des z.B., Alters, Geschlecht und des Gewichts, betrachtet werden, wenn man die wirkungsvolle Menge feststellt, um auszuüben. In einer Verkörperung der Erfindung, ist eine therapeutische Menge in einer Strecke ungefähr 0.1-100 mg/kg Körpergewichts eines Patienten, in einer anderen Verkörperung im Bereich von etwa 0.5-50 mg/kg Körpergewicht eines Patienten, pro tägliche Dosis. Das Mittel kann für Zeiträume der kurzen oder langen Dauer ausgeübt werden. Obgleich einige einzelne Situationen gegenteilig rechtfertigen können, gewählt kurzfristige Verwaltung z.B. 30 Tage oder kleiner, von Dosen größere als 25 mg/kg Körpergewicht eines Patienten, wenn sie mit langfristiger Verwaltung verglichen. Wenn langfristige Verwaltung z.B. Monate oder Jahre, verwendet, sollte die vorgeschlagene Dosis 25 mg/kg Körpergewicht eines Patienten im Allgemeinen nicht übersteigen.
Eine therapeutisch wirkungsvolle Menge P5P oder ein unter pharmazeutischem Gesichtspunkt annehmbares Salz davon für das Modulieren der Aktivität P2X7, der Entzündungantwort oder der extrazellularen Niveaus von IL-lβ oder für die Behandlung einer Krankheit, der Störung oder des Symptoms, in denen P2X7, eine Entzündungantwort oder IL-lβ impliziert, ausgeübt werden kann vor, übereinstimmend mit oder nach dem Anfang der Krankheit, der Störung oder des Symptoms.
Ein therapeutisches Mittel der Erfindung kann übereinstimmend mit oder im Anschluss an Mitteln ausgeübt werden, die bereits bekannt, um für die Behandlung verwendbar zu sein
der Krankheitzustand. „Gleichzeitige Verwaltung“ und „gleichzeitig ausüben“, wie hierin verwendet umfaßt eine therapeutische Verbund- und bekannte Therapie als zusatz ausüben wie z.B. in einem pharmazeutischen Aufbau oder in gelöster Form oder als unterschiedliche Bestandteile, wie z.B. der unterschiedlicher pharmazeutischer Aufbau oder Lösungen nacheinander, die gleichzeitig ausgeübt, oder zu verschiedene Zeiten aber nicht so entfernt in der Zeit so, dass die therapeutische Verbund- und bekannte Therapie nicht zusammenwirken kann und eine niedrigere Dosierungmenge der Aktivsubstanz nicht ausgeübt werden kann.
Es soll verstanden werden, dass diese Erfindung nicht auf spezifische Dosierungformulare, Fördermaschinen oder dergleichen begrenzt, und während so unterscheiden können. Es soll auch verstanden werden, dass die Terminologie, die hierin verwendet, mit dem Ziel die Beschreibung nur der bestimmten Verkörperungen ist, und nicht begrenzen soll.
P5P oder ein unter pharmazeutischem Gesichtspunkt annehmbares Salz können davon mündlich ausgeübt werden. Bevorzugte Munddosierungformulare enthalten eine therapeutisch wirkungsvolle Maßeinheitsdosis jedes aktiven Mittels, worin die Maßeinheitsdosis für sobald-täglich orale Einnahme verwendbar ist. Die therapeutische wirkungsvolle Maßeinheitsdosis von irgendwelchen der aktiven Mittel abhängt von der Zahl der Faktoren t, die zu den Fachleuten und im Licht der Datenübermittlung hierin offensichtlich sind. Insbesondere umfassen diese Faktoren: die Identität des ausgeübt zu werden Mittels, der Formulierung, des Verwaltungsweges eingesetzt, des Geschlechtes des Patienten, des Alters und des Gewichts und der Schwierigkeit der Bedingung, die behandelt und des Vorhandenseins der gleichzeitigen Krankheit den Magen-Darm-Kanal, das hepatobiliary System und das Nierensystem beeinflussend. Methoden für die Bestimmung von Dosierung und von Giftigkeit sind in der Kunst mit den Studien weithin bekannt, die im Allgemeinen in den Tieren und dann in den Menschen anfangen, wenn keine bedeutende Tiergiftigkeit beobachtet. Die Verwendbarkeit der Dosierung kann festgesetzt werden, indem man Triglyzeridstufen überwacht. Wo die bereitgestellte Dosis nicht Triglyzeridstufen veranlaßt, zu den normalen oder erträglichen Stufen zu sinken, mindestens 2 bis 4 Wochen der Behandlung folgend, kann die Dosis erhöht werden.
Methoden des Vorbereitens des pharmazeutischen Aufbaus, der eine unter pharmazeutischem Gesichtspunkt annehmbare Fördermaschine und ein P5P enthalten oder des unter pharmazeutischem Gesichtspunkt annehmbaren Salzes davon bekannt zu denen der Fähigkeit im Art.
Alle Methoden können den Jobstepp des Holens des Mittels der Erfindung in Verbindung mit der Fördermaschine und den Zusätzen umfassen. Die Formulierungen im Allgemeinen vorbereitet durch das Mittel nd der Erfindung in Verbindung mit einer flüssigen Fördermaschine oder einer fein geteilten festen Fördermaschine gleichmäßig und vertraut, holend oder und dann wenn notwendig und formen das Produkt in das gewünschte Maßeinheitsdosierungformular.
Im Allgemeinen kann eine Lösung eines therapeutischen Mittels, z.B.P5P, durch einfach mischendes P5P mit einer unter pharmazeutischem Gesichtspunkt annehmbaren Lösung vorbereitet werden z.B. gepufferte wässrige salzige Lösung bei einem Null- oder alkalischen pH, bei einer Temperatur der mindestens Raumtemperatur und unter sterilen Bedingungen. In einer Verkörperung vorbereitet die P5P Lösung sofort vor Verwaltung zum Säugetier t. Jedoch wenn die P5P Lösung auf einmal mehr als sofort vor der Verwaltung zum Säugetier vorbereitet, kann die vorbereitete Lösung unter den sterilen, gekühlten Bedingungen gespeichert werden. Außerdem kann die P5P Lösung in den Behältern gespeichert werden, die für das Schützen der P5P Lösung vor dem Licht, wie bernsteinfarbigen Phiolen oder Flaschen verwendbar sind.
Die Mittel der Erfindung können in den Tierstörungen (tierärztliche Anzeigen) und in den besonders Säugetieren besonders nützlich sein.
Die Erfindung, die weiter ist, liefert die Diagnose- und pharmazeutischen Sätze und die Installationssätze, die eine oder mehrere Behälter enthalten, die mit einen oder mehreren der Beiträge zu dem vorher erwähnten Aufbau der Erfindung gefüllt. Mit solchen Behältern sein verbunden kann ein Begriff in der Form, die durch eine Regierungsstelle vorgeschrieben, welche die Fertigung, den Gebrauch oder den Verkauf der pharmazeutischer Produkte oder der biologischen Produkte regelt und Genehmigung durch die Agentur der Fertigung, Gebrauch oder Verkauf des Produktes reflektieren
für menschliche Verwaltung.
Als vorher behandelte, hohe Aktivität des Empfängers P2X7 gefunden worden, in einer großen Vielfalt von Krankheiten, wie Epithelkrebs, Leukämie, Hirntumoren, Rückenmarkverletzung, Tuberkulose, Alzheimerkrankheit, neurodegenerative Krankheiten, autosomale rückläufige polycystic Nierekrankheit, Diabetes im Allgemeinen impliziert zu werden, einschließlich Typen I Diabetes, Prostatakrebs, Osteoporose, Knochenanordnung und -aufnahme, rheumatische Arthritis, multiple Sklerose, Myasthenia gravis, Crohns Krankheit, septischer Schlag und periodontale Infektion. Dieses den Erfindern vorgeschlagen, dass Empfänger P2X7 in diese Krankheitzustände mit.einbezogen werden kann.
Die Erfinder vermutet, dass folglich Hemmung der Atp-vermittelten abhängigen Bahnen P2X7 wie apoptosis in der Verhinderung, in der Pflege, in der Behandlung oder in der Heilung dieser Krankheitzustände wünschenswert sein kann. So Hemmnisse des Atp vermittelten Empfängers P2X7 - abhängige Bahnen wie apoptosis sein, als nützliche therapeutische Mittel für die Verhinderung, die Pflege, die Behandlung oder die Heilung der Krankheiten wünschenswert, in denen P2X7-dependent Bahnen wie apoptosis ein Faktor z.B. Epithelkrebs, Leukämie, Rückenmarkverletzung der Hirntumoren, Tuberkulose, Alzheimerkrankheit, neurodegenerative Krankheiten, autosomale rückläufige polycystic Nierekrankheit, Diabetes, einschließlich Typen I Diabetes, Prostatakrebs, Osteoporose, Knochenanordnung und -aufnahme, rheumatische Arthritis, multiple Sklerose, Myasthenia gravis, Crohns Krankheit, septischer Schlag und periodontale Infektion sind.
Überraschend entdeckt worden den anwesenden Erfindern, in einer Reihe von eleganten Experimenten, dass P5P Zellen vor Atp-vermittelt schützt, P2X7 abhängiges apoptosis, eine Anzeige des Abschaltens von Atp-vermittelt, Bahnen des Abhängigen P2X7. So kann P5P verwendet werden, um die P2X7-dependent Bahnen, wie apoptosis zu hemmen und kann das Starten solcher Bahnen in den Krankheiten verhindern, in denen P2X7 impliziert worden. P5P kann als wirkungsvolle Behandlungen für die Modulation von P2X7 und für Krankheiten folglich verwendet werden, in denen Verhinderung von
P2X7-dependent Bahnen wie apoptosis ist, wie Epithelkrebs, Leukämie, Rückenmarkverletzung der Hirntumoren, Tuberkulose, Alzheimerkrankheit, neurodegenerative Krankheiten, autosomale rückläufige polycystic Nierekrankheit, Diabetes, einschließlich Typen I Diabetes, Prostatakrebs, Osteoporose, Knochenanordnung und -aufnahme, rheumatische Arthritis, multiple Sklerose, Myasthenia gravis, Crohns Krankheit, septischer Schlag und periodontale Infektion wünschenswert.
Die Erfinder vermutet auch, dass Hemmung der Atp-vermittelten Bahnen P2X7 eine Vermittlung der Entzündungantwort ergeben kann, und eine Modulation der extrazellularen Niveaus von IL-lβ. So Hemmnisse des Atp-vermittelten Empfängers P2X7 - abhängige Bahnen wie apoptosis sein, als nützliche therapeutische Mittel für die Verhinderung, Pflege, Behandlung oder Heilung der Krankheiten oder der Störungen, in denen es gewünscht, um eine entzündliche Antwort, Krankheiten zu verringern, in denen IL-lβ impliziert, oder Krankheiten, in denen eine Verkleinerung in den Niveaus von extrazellularem IL-lβ gewünscht, zwecks die Krankheit zu verhindern, beizubehalten, zu behandeln oder zu kurieren wünschenswert. Solche Krankheiten oder Störungen umfassen klassische entzündliche Krankheiten wie chronische Wunde, chronische Entzündung, Abszeßanordnung, entzündliches Wartekörperlichsyndrom, einschließlich Sepsis, Blinddarmentzündung, Arteritis, Arthritis, Blepharitis, Bronchiolitis, Bronchitis, Bursitis, Cervicitis, Cholangitis, Cholecystitis, chorioamnionitis, Kolitis, Bindehautentzündung, Blasenkatarrh, dacryoadenitis, Dermatitis, dermatomyositis, Gehirnentzündung, Endokarditis, Endometritis, Enteritis, Enterocolitis, Epicondylitis, epididymitis, fasciitis, fibrositis, Gastritis, Gastroenteritis, Gingivitis, Hepatitis, hidradenitis suppurativa, Ileitis, iritis, Laryngitis, Brustdrüsenentzündung, Meningitis, myelitis, Myocarditis, myositis, Nephritis, omphalitis, oophoritis, Orchitis, osteitis, otitis, Pancreatitis, Parotitis, Perikarditis, Peritonitis, Pharyngitis, pleuritis, phlebitis, Pneumonie/Lungenentzündung, proctitis, Prostatitis, Rhinitis, Salpingitis, Sinusitis, Stomatitis, synovitis, Tendonitis, Tonsillitis, uveitis, Vaginitis, Vasculitis oder vulvitis. Solche Krankheiten oder Störungen umfassen auch Krankheiten und Störungen, in denen hohe extrazellulare Stufen IL-lβ spezifisch, wie entzündliche Darmkrankheit, Geschwüre hervorrufende Kolitis impliziert worden, Crohns Krankheit, Sjogrens Syndrom, die Knochenabnutzung, neuroinflammatory
Krankheiten wie Alzheimerkrankheit, Parkinson-Krankheit und traumatische Gehirnverletzung, sowie periodontale Krankheit.
Überraschend entdeckt worden den anwesenden Erfindern, in einer Reihe von eleganten Experimenten, dass P5P die Verarbeitung und Freigabe von IL-lβ verringert. So kann P5P verwendet werden, um die P2X7-dependent Freigabe von IL-lβ und die resultierende entzündliche Kaskade zu hemmen. P5P kann als wirkungsvolle Behandlungen für die Modulation von IL-lβ und die Modulation der Entzündung und für Krankheiten oder Störungen, in denen Modulation von IL-lβ oder Modulation der Entzündung, wie chronische Wunde, chronische Entzündung, Abszeßanordnung, entzündliches Wartekörperlichsyndrom, einschließlich Sepsis, Blinddarmentzündung, Arteritis, Arthritis, Blepharitis, Bronchiolitis, Bronchitis, Bursitis, Cervicitis, Cholangitis, Cholecystitis, chorioamnionitis, Kolitis, Bindehautentzündung, Blasenkatarrh, dacryoadenitis, Dermatitis, dermatomyositis, Gehirnentzündung, Endokarditis, Endometritis, Enteritis, Enterocolitis, Epicondylitis, epididymitis, fasciitis, fibrositis, Gastritis, Gastroenteritis, Gingivitis, Hepatitis, hidradenitis suppurativa, Ileitis folglich wünschenswert ist im Allgemeinen verwendet werden, iritis, Laryngitis, Brustdrüsenentzündung, Meningitis, myelitis, Myocarditis, myositis, Nephritis, omphalitis, oophoritis, Orchitis, osteitis, otitis, Pancreatitis, Parotitis, Perikarditis, Peritonitis, Pharyngitis, pleuritis, phlebitis, Pneumonie/Lungenentzündung, proctitis, Prostatitis, Rhinitis, Salpingitis, Sinusitis, Stomatitis, synovitis, Tendonitis, Tonsillitis, uveitis, Vaginitis, Vasculitis, vulvitis und Krankheiten und Störungen, in denen IL-lβ spezifisch, wie entzündliche Darmkrankheit, Geschwüre hervorrufende Kolitis, Crohns Krankheit, Sjogrens Syndrom, Knochenabnutzung, neuroinflammatory Krankheiten wie Alzheimerkrankheit, Parkinson-Krankheit und traumatische Gehirnverletzung impliziert worden, sowie periodontale Krankheit.
Überraschend und unerwartet, gefunden die anwesenden Erfinder, dass das meiste geprüfte B6 Mittel, wie Pyridoxin, Pyridoxinphosphat, Pyridoxal, Pyridoxamin in Verbindung stand und Pyridoxaminphosphat nicht wirkungsvoll waren, wenn es verarbeitendes IL-lβ hemmte und freigeben. Eine überraschende Entdeckung ist, dass P5P ist
eindeutig wirkungsvoll, unter den B6 in Verbindung gestandenen Mitteln geprüft, wenn die Verarbeitung und die Freigabe von IL-lβ gehemmt.
Diese Erfindung gekennzeichnet weiter durch die folgenden Beispiele. Diese Beispiele bedeutet nicht, um den Bereich der Erfindung zu begrenzen, die völlig in der vorangehenden Beschreibung festgelegt worden. Varianten innerhalb des Bereichs der Erfindung sind zu den Fachleuten offensichtlich.
Beispiel 1: Induktion des Zellen-Todes HEK 293 in den Zellen P2X7 (Ratte) mit Atp
HEK 293 Zellen transfected beständig, um Empfänger der Ratte P2X7, unter Verwendung der Standardgewebekulturtechniken (Surprenant et al., 1996) auszudrücken. Die Zellform bekannt, um irgendwelche der anderen P2X Empfänger (Schachter et al., 1997) nicht auszudrücken. Beständiger Ausdruck von P2X7 bestätigt durch westlichen Fleck (die Resultate nicht gezeigt).
Parent (HEK 293) Zellen, und HEK 293 die Zellen, die Ratte P2X7 ausdrücken (HEK 293 Zellen P2X7 (Ratte)) behandelt mit Atp (Sigma, A9062) um die Effekte von Atp auf die Entwicklungsfähigkeit der Zellen festzustellen. Zellenentwicklungsfähigkeit war unter Verwendung einer MTT Probe (Wen, 2003) entschlossen. Zellen behandelt mit zwischen μM 0 und 2 von Atp. MTT hinzugefügt den Zellkulturen 180 Minuten nach Atp-Behandlung. Die MTT Probe durchgeführt 60 Minuten nach dem Zusatz von MTT. Zellenentwicklungsfähigkeit war direkt zur Absorption 550 Nanometer des Lichtes durch die Zellkultur correlatable, wenn eine höhere Absorption höhere Zellenentwicklungsfähigkeit bedeutet. Die Zellkulturmedia gelöscht und die Zellen waren unter Verwendung DMSO solubilisiert. Die Absorption der solubilisierten Zellen gelesen.
Abbildung 1 zeigt die Zellenentwicklungsfähigkeit in den Zellen des Elternteils HEK 293. Beeinflußte μM bis 2 der Atp-Behandlung nicht erheblich die Entwicklungsfähigkeit der Elternteilzellen.
Abbildung 2 zeigt die Zellenentwicklungsfähigkeit HEK 293 in den Zellen P2X7 (Ratte). Die Zellen, die Ratte P2X7 ausdrücken, aufwiesen bedeutenden Verlust in der Zellenentwicklungsfähigkeit en, die mit 0.4 μM Atp-Behandlung beginnt.
Dieses Beispiel herstellt die Bedingungen el, die benötigt, um P2X7-dependent Bahnen, wie apoptosis, unter Verwendung, als Anzeige zu starten, die Tötung der Zellen in einem Atp vermittelt, P2X7-dependent Zellentod.
Beispiel 2: P5P Behandlung schützt Zellen vor Atp-Vermittelt, P2X7-Dependent Zellen-Tod
HEK 293 und HEK 293 Zellen P2X7 (Ratte) behandelt mit 0 bis 50 μM von P5P, ein in Verbindung gestandenes Mittel des Vitamins B6, in der Natriumsalzform (Chemie-Abteilung, CanAm Bioresearch Inc.). Dreißig Minuten später, behandelt Zellen mit 0.4 μM Atp, um die Effekte von Atp auf die Entwicklungsfähigkeit der MCI behandelten Zellen festzustellen. Steuerzellen empfingen Täuschungbehandlung von P5P und Täuschungbehandlung von Atp.
Zellenentwicklungsfähigkeit war unter Verwendung einer MTT Probe [16] entschlossen. MTT hinzugefügt den Zellkulturen 180 Minuten nach Atp-Behandlung. Die MTT Probe durchgeführt 60 Minuten nach dem Zusatz von MTT. Zellenentwicklungsfähigkeit war direkt zur Absorption 550 Nanometer des Lichtes durch die Zellkultur correlatable, wenn eine höhere Absorption höhere Zellenentwicklungsfähigkeit bedeutet.
Abbildung 3 zeigt die Zellenentwicklungsfähigkeit HEK 293 in den Zellen. Steuern Sie Zellen empfangene Täuschungbehandlung von P5P und Täuschungbehandlung von Atp. Zellen in der „0“ Spalte empfingen, Täuschungbehandlung von P5P aber behandelt mit Atp. Wie in Abbildung 1 gesehen, beeinflußte 0.4 μM Atp-Behandlung nicht erheblich die Entwicklungsfähigkeit HEK 293 der Zellen. Als solches hatte P5P Behandlung auch keinen bedeutenden Effekt auf die Entwicklungsfähigkeit der Zellen.
Abbildung 4 zeigt die Zellenentwicklungsfähigkeit HEK 293 in den Zellen P2X7 (Ratte). Wie in Einklang mit Abbildung 2, aufwiesen die Zellen, die Ratte P2X ausdrücken, bedeutenden Verlust in der Zellenentwicklungsfähigkeit en, als behandelt mit Atp. Behandlung von μM 1.5 bis 15 von P5P nicht erheblich beeinflußte diese Entwicklungsfähigkeit. Jedoch als behandelt mit μM 50 von P5P, verbessert halbe Stunde vor der Atp-Behandlung, Zellenentwicklungsfähigkeit erheblich. Tatsächlich gab es keinen bedeutenden Unterschied zwischen der Entwicklungsfähigkeit der Atp behandelten Zellen, die mit P5P „innoculated“, und der Steuerzellen.
Dieses Beispiel herstellt, dass P5P Behandlung bei genügender Konzentration Zellen vor Atp-vermittelt schützt, P2X7 Abhängiger, Bahnen wie apoptosis.
Beispiel 3: P5P hemmt die Atp-verursachte Verarbeitung und Freigabe von IL-lβ von PMA/LPS angeregten THP-I Zellen
Nicht-anhaftende THP-I, monocytic Zellen (ATCC) vorbehandelt mit phorbol-12- myristate-13-acetate (PMA), das die Zellen in Makrophage-wie Zellen unterschied. Kurz ungefähr 8xlO6 THP-I geerntet Zellen, gebeizt, erneut ausgesetzt in den Media, denen PMA bei einer abschließenden Konzentration von 0.5 μM hinzugefügt. Die Zellen ausgebrütet 3 Stunden lang, dann gesammelt, gewaschen und überzogen.
Der Next day, die Zellen behandelt mit lipopolysaccharide (LANGSPIELPLATTEN) um Produktion IL-lβ anzuregen. Kurz gelöscht die Media und ersetzt durch RPI Media + 10% das fötale Kalbserum, das 100 ng/ml der LANGSPIELPLATTEN enthält. Zellen ausgebrütet zusätzlichen 24 Stunden lang en.
Media geändert dann und das Testmittel (Pyridoxinphosphat, Pyridoxal, P5P, Pyridoxamin oder Pyridoxaminphosphat) hinzugefügt einer abschließenden Konzentration von μM 0, 0.5, 1.5, 5, 15, 50 oder 150. Zellen vorbehandelt für 30 Minuten 30, dann ersetzt die Media durch die Media, die 5mM Atp sowie das Testmittel enthalten. Zellen ausgesetzt Atp eine Stunde lang ne. Media waren dann
gesammelt und die Menge von IL-lβ in den Media war unter Verwendung eines menschlichen IL-lβ ELISA entschlossen (R&D-Systeme).
Resultate ausgedrückt als das mean±sem t. Statistische Analyse durchgeführt unter Verwendung des Massenc$ttests lyse (Medistats). Abbildungen 5-10 Erscheinen der Effekt des Testmittels (Pyridoxin, Pyridoxinphosphat, Pyridoxal, P5P, Pyridoxamin und Pyridoxaminphosphat, beziehungsweise) bei verschiedenen Konzentrationen (0, μM 0.5, 1.5, 5, 15, 50 und 150 auf Atp (5mM) verursachte IL-lβ Verarbeitung und Freigabe von PMA/LPS anregten THP-I Zellen n. Stufen IL-lβ gemessen in den Zellkulturmedia durch ELISA und die Resultate ausgedrückt als Prozent der unbehandelten (Grundlinien) Kontrollen.
Die Resultate zeigten, dass Behandlung der PMA/LPS vorbereiteten THP-I Zellen mit Atp einen bedeutenden Anstieg in der Verarbeitung und in der Freigabe von IL-lβ in die Kulturmedia verursachte (# = P < 0.05, ## = P < 0.01 und ### = P < 0.001). Behandlung der Zellen mit Pyridoxin, Pyridoxinphosphat, Pyridoxal, Pyridoxamin oder Pyridoxaminphosphat hatte keinen bedeutenden Effekt auf die Atp-verursachte Verarbeitung und Freigabe von IL-lβ an irgendwelchen der Konzentrationen prüfte (* = P < 0.05, ** = P < 0.01 und *** = p < 0.001). Behandlung der Zellen mit P5P jedoch hemmte erheblich die Atp verursachte Verarbeitung und die Freigabe von IL-lβ (* = P < 0.05, ** = P < 0.01 und *** = P < 0.001).
Beispiel 4: P5P Behandlung schützt Zellen vor BzATP-Vermittelt, P2X7- abhängiger Zellen-Tod
Die Beispiele 1-2 wiederholt und ersetzen BzATP für Atp. BzATP bekannt, um ein spezifischer Agonist der Empfänger P2X7 zu sein. Dieses Beispiel erbringt den Resultaten, die mit den Beispielen 1-4 in Einklang sind, weiter, herstellend, dass die verwendete Bahn eine Bahn des Abhängigen P2X7 ist.
Beispiel 5: Effekt von P5P auf die cytokine Antwort von lipopolysaccharide behandelte Ratten
Die Sprague Dawley Ratten, die ungefähr 30Og wiegen, behandelt mit 1, 3 oder 10 mg/kg P5P (oder eine salzige Steuerung). Dreißig Minuten später (t=30), gegeben die Tiere eine intraperitoneale Einspritzung 50μg/kg der LANGSPIELPLATTEN (oder der salzigen Steuerung). Temperatur der Tiere gemessen, und eine Blutprobe gesammelt bei 240 Minuten Nachbehandlungs (t=240).
Blutproben übertragen auf heparinierte Gefäße und Plasma getrennt durch Zentrifugierung. Plasma geprüft für IL-lβ, [IL-6 und TNF-α].
Das Experiment bestätigt, dass LANGSPIELPLATTE-Behandlung in vivo einen bedeutenden Anstieg in der Verarbeitung und in der Freigabe von IL-lβ [IL-6 und TNF-α] in das Plasma verursacht. In vivo Behandlung mit P5P hemmt erheblich von IL-lβ verarbeiten und Freigabe in vivo.
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